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常見細胞實驗原理一文get!

 更新時間:2024-10-08 點擊量:457

一、細胞周期檢測

1.概念

細胞周期是指細胞從上一次分裂完成開始到下一次分裂完成時為止,包括兩個階段:分裂間期和分裂期。細胞周期檢測的是單個細胞的增殖速度,通過縮時攝影來測定。

2.原理

細胞不同時期,細胞所含的DNA量不同。正常細胞的二倍體含量通常為2N,則在G/G1,細胞的DNA量為2N,而G2/M細胞DNA含量4NSDNA量為2N4N。碘化丙錠(PI)可以與細胞內(nèi)的DNARNA結(jié)合,通過RNA酶將RNA消化后,檢測到與DNA結(jié)合的PI熒光強度可以直接反映細胞內(nèi)DNA含量的多少。因此,采用流式細胞術(shù)PI染色法檢測細胞內(nèi)DNA含量時,可將細胞周期分為G/G1期、S期和G2/M期,并通過特殊軟件計算各時相的百分比。  

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細胞周期檢測結(jié)果展示

二、細胞克隆實驗

1. 概念

細胞克隆,又稱為細胞集落,指的是單個細胞在體外增殖6代以上,其后代所形成的細胞群體。細胞克隆實驗的目的是檢測細胞增殖能力、細胞侵襲性、對殺傷因素敏感性等項目的重要技術(shù)方法。

2.原理

接種細胞后,只有同時具有貼壁和增殖活力的細胞才會形成克隆??寺⌒纬陕史从臣毎莫毩⑸婺芰Φ膹娙酰糜谠u價細胞群體依賴性和增殖能力??寺⌒纬陕逝c接種密度有一定關(guān)系,在進行測定時需要將接種的單個細胞分散為懸液,并直接接種在培養(yǎng)皿中進行持續(xù)一周以上的培養(yǎng),并在此期間進行檢查。當出現(xiàn)新的、由單個原始生長出來的完整幾何結(jié)構(gòu)時,則可以停止培養(yǎng)過程。

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細胞克隆結(jié)果展示

三、細胞凋亡實驗

1.概念

細胞凋亡是指細胞在一定的生理或病理條件下,受內(nèi)在遺傳機制控制,按照自身程序主動性、生理性的死亡過程。細胞凋亡受凋亡相關(guān)基因調(diào)控,故又稱為程序性細胞死亡。

2.原理

一般而言,細胞凋亡的早期主要涉及胞內(nèi)一些蛋白質(zhì)的變化,如蛋白質(zhì)量的增加、位置的轉(zhuǎn)移、狀態(tài)的改變等,還有一些磷脂和Ca2+含量的變化;中晚期則伴隨著DNA斷裂和凋亡小體的形成;而整個凋亡過程中細胞形態(tài)也會發(fā)生改變。

四、細胞侵襲實驗

1.概念

細胞侵襲實驗將細胞小室(Transwell小室)放入培養(yǎng)板中,上室(細胞小室)內(nèi)盛裝上層培養(yǎng)液,下室(培養(yǎng)板)內(nèi)盛裝下層培養(yǎng)液,上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔。將細胞種在上室內(nèi),由于聚碳酸酯膜通透性,下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細胞,從而可以研究下層培養(yǎng)液中的成分對細胞生長、運動等的影響。

2.原理

細胞侵襲指細胞在原位突破基底膜,然后內(nèi)滲進入血管、淋巴管的過程。

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細胞侵襲結(jié)果展示

五、細胞遷移實驗

1. 概念

細胞遷稱為細胞移動、細胞爬行或細胞運動,是指細胞在接收到遷移信號或感受到某些物質(zhì)的梯度后而產(chǎn)生的移動。

2. 原理

細胞遷移實驗是測定細胞遷移運動與修復(fù)能力的方法,類似體外傷口愈合模型。在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細胞上,用微量槍頭或其他硬物在細胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線,去除中央部分的細胞,然后繼續(xù)培養(yǎng)細胞至實驗設(shè)定的時間,取出細胞培養(yǎng)板,觀察周邊細胞是否生長至中央劃痕區(qū),以此判斷細胞的生長遷移能力,實驗通常需設(shè)定正常對照組和實驗組,實驗組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等組別,通過不同分組之間的細胞對于劃痕區(qū)的修復(fù)能力,可以判斷各組細胞的遷移與修復(fù)能力。

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細胞遷移實驗結(jié)果展示

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